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企業展示正常情況下機體內凝血和抗凝血系統相互拮抗，使血液呈液體狀態完成全身的血液循環[1]。但機體凝血和抗凝血系統功能在受到某些因素的影響，如外傷和感染時會發生紊亂，導致血栓形成。血管內皮損傷、血流紊亂和凝血反應異常是影響血栓形成的主要因素，通常三個因素相互作用、但常以某一因素為主[2]。在血栓性疾病中，有缺血性腦血管病、心肌梗死、肺栓塞以及手術或外傷后引起的各種動靜脈血栓等。這些血栓性疾病涉及多學科并且發病率高，而且具有很高的致死率和致殘率。因此建立臨床相關性高、穩定性高的血栓類動物模型，對于支持和促進血栓性疾病治療的藥物開發是十分必要的。
一、體外血栓模型
采集動物的新鮮動脈血液，用枸櫞酸鈉抗凝，制備血栓，試驗前需用PBS對血栓進行充分洗滌至無明顯紅細胞掉落。選取合適的反應體系將藥物和血栓孵育一定時間后，取上清液進行OD值測量，以OD值的高低反應溶栓效果（圖1）。
【圖1】阿替普酶在體外血栓模型中的溶栓效果
二、半體內血栓模型
半體內血栓模型采用的是大鼠動靜脈旁路模型。大鼠麻醉后仰臥姿勢固定，分離左側頸總動脈和右側頸外靜脈，然后取一根用生理鹽水浸泡滿的聚乙烯套管（由三段聚乙烯管制成，在中間管放入放置一根5cm長的絲線），一端先插入左側頸總動脈，另一端插入右側頸外靜脈，絲線固定。動脈端用動脈夾夾住，打開動脈夾后血液從右側頸總動脈經聚乙烯管返回左頸外靜脈形成血流回路[3]。血流中的血小板接觸旁路循環中的絲線粗糙面時，可發生黏附、聚集，環繞絲線表面形成血栓。可于動靜脈旁路開通之前或之后給予藥物，以絲線附著的血栓濕重和干重評判藥物抗血小板聚集效果（圖2）。
【圖2】大鼠動靜脈旁路血栓模型
三、體內血栓模型 3.1 ? 機械誘導法 3.2 ? 電流損傷法 3.3 ? 光化學誘導法
本法系將光敏物質，如虎紅B、熒光素鈉等，注射入機體后在特定波長光線的照射激發下，光敏物質產生單態氧繼而損傷血管內皮細胞引起白細胞附壁激發血小板粘附、聚集而形成血栓。光化學法可以用于建立腦血栓模型和冠狀動脈血栓模型等。麻醉大鼠后經左側顳部入路，于左眼外眥和左耳外耳道連線上作一垂直的長約2cm的弧形切口，分離顳肌去除顴弓，撐開下頜關節，在卵圓孔前上方用顱骨鉆磨薄顱骨，拆開后即可見大腦中動脈（MCA），靜脈注射虎紅B用激光MCA可形成血栓，造成腦梗死，可通過神經功能損傷評分和腦梗死面積評價。冠狀動脈血栓模型是在呼吸機的輔助下，開胸暴露左冠狀動脈前降支，連接心電圖監測梗死情況，注射光敏物質后激光照射，ST段抬高0.1 mV時表明血栓形成，心肌已經缺血，可以通過心臟超聲和TTC染色評價[5]。
3.4 ? 化學藥物誘導法
是指使用一些特殊化學試劑（FeCl3、胰蛋白酶、過氧化氫等）使血管內膜受損而形成血栓。其中常用的是FeCl3血栓形成法，此方法易操作、重復性好，形成的血栓結構接近于人類自發形成的血栓結構，對進一步的研究有著顯著的意義。小鼠的頸動脈血栓模型和下腔靜脈血栓模型常用FeCl3損傷，以浸滿FeCl3的小濾紙片敷在血管上方損傷血管，同時進行血管血流檢測（圖3）。FeCl3還可用于腦血栓模型，分離MCA的方法同光化學誘導法，暴露MCA后敷上浸滿FeCl3的小濾紙片15min可造成腦缺血，可通過神經功能損傷評分和腦梗死面積評價。
【圖3】FeCl3誘導的小鼠頸動脈血栓模型
3.5 ? 手術法
結語 血栓類動物模型在探究凝血機制以及藥物篩選和藥效學評價方面扮演了重要角色，為支持血栓性疾病治療的藥物開發提供了可靠的實驗基礎。目前已經發展出多種成熟的動物血栓模型，鑒于每種血栓模型都有其獨特特點，因此在選擇和應用血栓動物模型時，應根據研究目的和需求選擇適當的方法。例如，電流損傷法適用于作動脈血栓的研究，結扎法則適用于作靜脈血栓的研究，機械損傷法在動脈血栓和靜脈血栓中均適用。對于研究腦血栓栓塞，可以選擇FeCl3血栓形成法和光化學法。 有濟醫藥的心腦血管藥效學研究平臺配備科學、先進的儀器設備，有多名經驗豐富的專題負責人，在模型構建和藥效學評價方面具有豐富的研究經驗和項目申報經驗，能夠提供全面的血栓類動物模型的藥效評價以及相關的機制探究服務。
